Detección de Mycobacerium bovis en leche de cabra mediante métodos moleculares: ampliación isotérmica medida por bucles vs. reacción en cadena de la polimerasa

Abstract

Para producir alimentos de buena calidad y sanitariamente seguros, y además responder a las exigencias de los mercados, se debe contar con rodeos sanos. Mycobacterium bovis (M. bovis), es el principal agente causal de la tuberculosis (TB) en animales, enfermedad zoonótica crónica diseminada mundialmente, que afecta tanto a bovinos como a otras especies de importancia pecuaria como búfalos, cerdos y cabras. La TB provoca serios problemas económicos en el sector pecuario, al reducir la eficiencia productiva de los animales y dificultar la comercialización de sus productos derivados. La lucha contra la TB está basada en su detección y control, para lo cual se necesitan técnicas de diagnóstico rápidas, sensibles y específicas, que permitan la identificación de los focos de infección y su posterior control. El objetivo de este trabajo fue implementar y adecuar herramientas de biología molecular para detectar M. bovis en leche de ganado caprino, para brindar alternativas diagnósticas y estrategias complementarias a las utilizadas en el Plan Nacional de Control y Erradicación de la Tuberculosis bovina (PNCETBB) en Argentina. Se realizó una comparación entre (a) la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) utilizando la secuencia IS6110, y (b) la PCR Touch-Down utilizando IS6110 ó (c) Rv2807, y (d) la PCR-TbD1. Se evaluaron los métodos diagnósticos en muestras de campo considerando al cultivo como prueba de oro del diagnóstico de la enfermedad. La sensibilidad fue de 100% para PCR-TbD1 y de 42,9% tanto para LAMP IS6110 como PCR-IS6110 y PCR-Rv2807, mientras que la especificidad fue de 88,1% tanto para PCR-TbD1 como para PCR-IS6110 y PCR Rv2807, y de 85,7 para LAMP-IS6110. El grado de concordancia respecto al cultivo fue adecuado para PCR-TbD1, mientras que resultó débil para las restantes pruebas diagnósticas. Por otra parte, la concordancia entre PCR IS6110 y PCR-Rv2807 fue del 100% y entre LAMP-IS6110 y PCR IS6110/Rv2807 de 94,5%. LAMP-IS6110 podría utilizarse como herramienta de diagnóstico preliminar en laboratorios de baja complejidad mientras que PCR-TbD1 como método de laboratorios de referencia. Finalmente, por PCR en tiempo real, se estimó que la excreción de M. bovis por leche de los animales analizados fue variable, requiriéndose continuar con la optimización del método para futuros estudios.